Po zdobyciu najszybszego czasu podczas wolnej sesji, Hiszpan Jorge Lorenzo (Fortuna Honda) potwierdził swoją wysoką formę i podczas popołudniowych kwalifikacji wywalczył pole position w klasie 250cc strącając tym samym Caseya Stonera (Aprilia) z najlePo zdobyciu najszybszego czasu podczas wolnej sesji, Hiszpan Jorge Lorenzo (Fortuna Honda) potwierdził swoją wysoką formę i podczas popołudniowych kwalifikacji wywalczył pole position w klasie 250cc strącając tym samym Caseya Stonera (Aprilia) z najlepszego miejsca na 2 pozycję.
Honda będzie dążyła do zwycięstwa w klasie 250cc w Mugello, ostatnie zwycięstwo zanotował tu Max Biaggi w 1997 roku, japońskiego producenta w przednim rzędzie będą reprezentować także Andrea Dovizioso (3 miejsce) i Randy de Puniet (4 miejsce).
Drugi rząd otwiera Sebastian Porto (Aprilia Aspar),dalej Alex de Angelis. Dani Pedrosa z zespołu Movistar Honda był siódmy, a Hector Barbera z zespołu (Fortuna Honda) ósmy.